Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型心血管疾病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常造出现肾脏自身突变到经常造出现1改型肝炎诊疗病变的困难重重叛将在儿童后期就有不错的叙述，多个肾脏自身突变无病变的儿童里有70%在突变转换后10年内肺结核肝炎，而随访15年的儿童这一生产量减小到84%。一般来说于之下，占诊疗1改型肝炎一半以上的改型1改型肝炎的发作机制还未得到充分的研究。

越来越多的人开始用到分期系统来表述1改型肝炎的困难重重：群体在经常造出现多种肾脏自身突变时转到第1阶段，经常造出现血糖异常时转到第2阶段，经常造出现病变时转到第3阶段。一些多发肾脏自身突变无病变的群体，在1期和2期，困难重重较迟，并发展为发作的1改型肝炎。我们以前叙述了一四组在首次扫描到多种肾脏自身突变样本后至不算10年无肝炎的快得多困难重重者，这四组病变人数不算，但特点非常明确。随后，我们发现肾脏自身蛋白特异性CD8+T巨噬细胞反应在困难重重较迟的病变里连续性不长期存在，但在近期发作和或多或不算的肝炎病变里很格外容易扫描到。这可能得出结论，与困难重重病变一般来说于，这些病变自身特异性的可调提高。

最初研究得出结论，尽管可调性T巨噬细胞(Treg)生产量正常，但肝炎病变长期存在一些系统缺点，其里之外对IL-2的反应技能降低。此外，肝炎病变里的波动CD4+T巨噬细胞可能对可调格外具抵抗性，观感为波动T巨噬细胞的消除弱化，自然显现出的Treg和体外显现出的游离Treg，以及蛋白经历的CD4+T巨噬细胞里IL-2反应弱化。本研究的目的是叙述了CD4+可调性T巨噬细胞(Treg)在一小群极较迟困难重重者里的特点，他们的平均平均年龄为43岁(31-72岁)，随访等待时间为18-32年。

原理：BOX研究是一项以人群为基础的纵向研究，在21岁所列确诊的病变亲属里检查1改型肝炎的脆弱因素。我们以前叙述了经常性较迟困难重重者的特点，他们保有多重肾脏自身突变无病变超过10年，但未经常造出现肝炎的诊疗病变，迟性或非透过性自身免疫。随后，10名继续保有无肝炎并主动缺少大量体内样本的较迟困难重重者归入T和B巨噬细胞系统数据分析。在现在的研究里，8名迟困难重重者(SP四组)，里位平均年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肾脏自身突变无病变。所有的大多数人都正处于1改型肝炎困难重重的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身突变对某些蛋白的无病变反应，然而，一名病变已经正处于2期至不算6年，但未经常造出现诊疗病变，一名病变被诊疗为肝炎，该实验者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析里对该丝氨酸透过了单独评估。复合外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，采用多参数流式巨噬细胞忍术和T巨噬细胞消除试验评估丝氨酸里Treg的频叛将、表改型和系统。用到FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)透过无监督聚类数据分析，评估Treg表改型。

结果：与健康丝氨酸一般来说于，来自迟困难重重体的失忆CD4+T巨噬细胞的监督聚类看出，启动时的失忆CD4+ Treg频叛将减小，与糖皮质激素游离的TNFR就其蛋白(GITR)隐含减小有关。一名HbA1c升高的病变与困难重重较迟者和最简单的印证四组一般来说于，Treg小曲有所不尽相同。系统新发现，与健康丝氨酸一般来说于，来自较迟困难重重体的Treg介导的CD4+波动T巨噬细胞消除相对来说受损。观感为对波动CD4+T巨噬细胞CD25和CD134隐含的消除减小。

所示1 深入的表改型数据分析看出，CD4+Treg亚改型在迟困难重重链表里减小。由FlowSOM作用于的Treg室，聚集在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据上面物隐含鉴定造出10个元簇:失忆T巨噬细胞_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +失忆T巨噬细胞;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)用到9个不尽相同Treg上面作用于的10个元簇的MST。每个终端代表者一个集群(100个集群)，格外大的元集群(10个元集群)在终端四组周围成品。每个终端里的饼所示表示单个上面的隐含档次。(b)每个元聚类的热所示，以看出连续性上面隐含。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)作用于所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说总质量为每个metacluster装支线所示(总质量> 0.05%)确定为HD和SP四组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T巨噬细胞(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T巨噬细胞(l)。深蓝色带子代表者**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon以此类推符号秩检测。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 用到CITRUS的预测模改型断定，Treg频叛将的减小是困难重重较迟的标志。分级暂时性(a - f)和葡萄数据分析(g-k)非常SP大多数人和最简单的HD大多数人在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表者性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含透过复合，模拟FlowSOM群体。(b) HD(外缘)和SP(蓝点)四组以及丝氨酸SP 606(深蓝色)里CD25+ cd127的频叛将统计所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性子集的装支线所示;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇棒状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含低压着色，圆圈突造出的簇被识别为SP和HD链表之间的不尽相同。(j)装支线所示看出了在SP(蓝点)和HD(灰点)四组里，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的一般来说总质量(生产量)。(k)直方所示看出每个簇的表改型(粉红色)和Treg上面一般来说隐含与着重隐含(紫色);上列，磁盘Treg_3;上头一行，磁盘Treg_4。着重与所有其他簇里上面的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon以此类推符号秩检测

所示3 与健康献血者一般来说于，困难重重较迟者失忆treg的GITR减小。每个失忆CD4+T巨噬细胞元簇(失忆T巨噬细胞_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +失忆T巨噬细胞;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个隐含上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的隐含热所示(sp606不之外在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇里所有HD(黄褐色)、所有SP(紫色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR隐含接在，看出直方所示(c)和统计所示(d)。Wilcoxon以此类推符号秩和检测，p< 0.07(深蓝色)所有丝氨酸之外，p< 0.05(紫色)丝氨酸SP 606和最简单的HD不之外在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR隐含，从分级暂时性，从所有HD(黄褐色)、所有SP(紫色)和SP 606(深蓝色)接在，看出直方所示(e)和统计所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon以此类推符号秩检测

所示4 来自较迟困难重重的CD4+ treg巨噬细胞控制波动CD4+T巨噬细胞的技能降低。SP四组用紫色的支线和带子表示，HD四组用黑色的支线和带子表示，深蓝色的支线/带子表示丝氨酸sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞透过分选。CD4+CD25−(转发者)被上面为CFSE, Treg按推论的生产量校准。用抗CD3 /28微珠酪氨酸巨噬细胞，培育3紧接著透过流式巨噬细胞忍术扫描。(a-d)与CD4+转发者一般来说应的treg培育(complex)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培育。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE消除生产量(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除生产量。用到无病变印证(启动时的鼓动巨噬细胞不含treg)算出消除生产量。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

所示5 波动CD4+T巨噬细胞对较迟困难重重的T巨噬细胞酪氨酸的消除格外敏感。SP四组用紫色的支线和带子表示，HD四组用黑色的支线和带子表示，深蓝色的支线/带子表示丝氨酸sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞透过分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel上面，treg按推论的生产量校准。用抗CD3 /28微珠酪氨酸巨噬细胞，培育3紧接著透过流式巨噬细胞忍术(CD25反染)和巨噬蛋白酶数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培育。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE消除调升(b)。(c,d) CD25消除调升(c)和CD134消除调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育里的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

推论：我们得造出的推论是，来自较迟困难重重子的酪氨酸失忆CD4+Treg在GITR隐含里得到了扩展和比较丰富，突显了全面性研究Treg在1改型肝炎风险群体里的异质性的有效性。

原文造原文：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28